細(xì)菌的人工培養(yǎng)

人工培養(yǎng)細(xì)菌是根據(jù)細(xì)菌的生理需求和繁殖規(guī)律，用人工方法提供給細(xì)菌所需的各種條件下培養(yǎng)細(xì)菌。這對(duì)細(xì)菌感染性疾病的診治及生物制品的研制等具有重要意義。

一、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基時(shí)人工培植的適合細(xì)菌生長繁殖的營養(yǎng)物制品，培養(yǎng)基的PH值一般為7.2-7.6，經(jīng)滅菌后才能使用。根據(jù)培養(yǎng)基用途不同可將培養(yǎng)基分為以下幾種：

（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有細(xì)菌生長繁殖所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)，最常用的是肉湯培養(yǎng)基，即在牛肉浸液中加入適量的蛋白胨、氯化鈉、磷酸鹽、調(diào)節(jié)PH值為7.2-7.6，經(jīng)滅菌處理后可供大多數(shù)細(xì)菌培養(yǎng)用。

（2）營養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液、血清、酵母浸液等營養(yǎng)物質(zhì)，供營養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長。

（3）選擇培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)化學(xué)物質(zhì)，以抑制某些細(xì)菌生長，而有利于另一類細(xì)菌生長繁殖，從而將后者從混雜的細(xì)菌群眾選擇分離出來。如SS瓊脂培養(yǎng)基中的膽鹽、煌綠等可疑值革蘭陽性菌和大腸埃希菌，從而可以從糞便中分離出沙門菌和志賀菌。

（4）鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入特定的單糖和氨基酸作為底物和相應(yīng)的指示劑，觀察細(xì)菌再次培養(yǎng)基中是否能分解這些糖或氨基酸產(chǎn)生不同物質(zhì)，從而鑒別細(xì)菌，如伊紅亞甲藍(lán)培養(yǎng)基、糖發(fā)酵管等。

（5）厭氧培養(yǎng)基：專供厭氧菌的分離培養(yǎng)和鑒定用的培養(yǎng)基。例如，在培養(yǎng)基中加入肉渣等還原劑的苞肉培養(yǎng)基，并用液狀石蠟或凡士林封口，隔絕空氣，使培養(yǎng)基內(nèi)稱為無氧環(huán)境。

根據(jù)培養(yǎng)基物理性狀不同可將其分為液體、半固體和固體培養(yǎng)基三大類。液體培養(yǎng)基常用語細(xì)菌的增菌培養(yǎng)和細(xì)菌的鑒定；在液體培養(yǎng)基中加入0.2%-0.5%的瓊脂即制成半固體培養(yǎng)基，常用語保存菌種及細(xì)菌動(dòng)力觀察；若加入2%-3%的瓊脂即制成固體培養(yǎng)基，常用語分離細(xì)菌和保存菌種。

二、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象

（一）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象

細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中可呈三種生長狀態(tài)：①渾濁生長：大多數(shù)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長后呈均勻渾濁狀態(tài)，如葡萄球菌。②沉淀生長：少數(shù)呈鏈狀生長的細(xì)菌或粗糙型細(xì)菌在液體培養(yǎng)基底部形成沉淀，培養(yǎng)液較清，如鏈球菌。③菌膜生長：專性需氧性細(xì)菌在液體培養(yǎng)基表面形成菌膜，如枯草桿菌。臨床用的澄清透明的注射液如果發(fā)現(xiàn)上述任何一種現(xiàn)象，均表明已被細(xì)菌污染，禁止使用。

（二）細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象

半固體培養(yǎng)基瓊脂含量少而較軟，有鞭毛的細(xì)菌可沿著穿刺線向四周擴(kuò)散，呈羽毛狀或云霧狀渾濁生長；無鞭毛的細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基上只能延穿刺線呈明顯的現(xiàn)狀生長，周圍培養(yǎng)基基本透明澄清。常用于細(xì)菌動(dòng)力觀察。

（三）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象

細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上課形成菌落或菌苔。吧細(xì)菌劃線接種到固體培養(yǎng)基表面，一般經(jīng)過37℃18-24h培養(yǎng)，單個(gè)細(xì)菌就可以生長繁殖呈肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)，稱為菌落（Colony)。不同的細(xì)菌形成的菌落大小、形狀、顏色、透明度、表面光滑或粗糙、邊緣整齊及溶血情況各有差異，其特征可以作為細(xì)菌鑒別的中藥依據(jù)。菌落一般分為兩種類型①光滑型菌落：表面光滑、濕潤、邊緣整齊。②粗糙型菌落：表面粗糙、干燥、邊緣不整齊。講一個(gè)菌落挑取移種到另一個(gè)培養(yǎng)基中，生長出來的細(xì)菌為純種，稱為純培養(yǎng)，用于細(xì)菌的鑒定。許多菌落融合在一起形成菌苔（lawn）。

三、人工培養(yǎng)細(xì)菌的試劑意義

（一）在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

1、病原菌的細(xì)菌學(xué)研究 在進(jìn)行病原菌的細(xì)菌學(xué)研究時(shí)，必須首先經(jīng)純培養(yǎng)得到初中細(xì)菌才能作為研究的材料。

2、感染性疾病的病原學(xué)診斷和治療 對(duì)患者標(biāo)本中分離并將定出病原菌是診斷感染性疾病的最可靠指標(biāo)，病原菌的藥物敏感試驗(yàn)對(duì)臨床選擇有效的抗生素治療具有指導(dǎo)意義。

3、生物制品的制備 人工分離培養(yǎng)所得的純細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物，可制備疫苗、類毒素、診斷出標(biāo)準(zhǔn)菌液、或經(jīng)類毒素、純細(xì)菌免疫動(dòng)物后制備抗毒素、及診斷血清、用于傳染性疾病的診斷、預(yù)防劑治療

（二）其他方面的應(yīng)用

    利用細(xì)菌的培養(yǎng)和發(fā)酵，可提純精制的抗生素、維生素醇類、醬油、未經(jīng)等產(chǎn)品，還可用于是由脫蠟，污水處理，制造菌肥等。利用細(xì)菌繁殖快、以培養(yǎng)的特點(diǎn)，可將細(xì)菌作為基因受體細(xì)胞，如將人或動(dòng)物細(xì)胞中編碼胰島素的基因從組到質(zhì)粒上，再倒入大腸埃希菌，就能從大腸埃希菌的培養(yǎng)液中獲得大量基因工程胰島素。

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司