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植物蔗糖酶（sucrase）試劑盒說明書

點擊次數(shù)：1070　日期：2016/8/31 8:43:48

植物蔗糖酶（sucrase）試劑盒說明書
 
分光光度法 50 管/48 樣
 
測定意義：
 
蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的關(guān)鍵酶之一，能夠水解蔗糖變成相應(yīng)的單糖而被機體吸收。
測定原理：
 
本試劑盒采用 3.5－二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化產(chǎn)生的還原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5－二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。此法操作簡便、迅速、雜質(zhì)干擾較小。
所需的儀器和用品：
 
可見分光光度計、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
 
試劑的組成和配制：
 
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
 
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存，用時每瓶加入 5mL 蒸餾水充分溶解，現(xiàn)配先用；試劑三：液體 5mL×1 瓶，常溫保存；
樣品測定的準(zhǔn)備：
 
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
加樣表和測定步驟：
 
試劑名稱（μL）
 
對照管
 
測定管
試劑一
 
50
 
50
蒸餾水
 
100
 
 
樣本
 
 
 
100
試劑二
 
50
 
50
 
 
置于 25℃準(zhǔn)確水浴 10min
 
 
 
 
 
 
試劑三
100
 
100
 
 
 
 
 
混勻， 100℃水浴 5min 左右（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫
 
 
 
 
 
蒸餾水
700
 
700
 
 
 
 
 
 
混勻，520nm 蒸餾水調(diào)零，測定各管吸光值，ΔA=A 測定-A 對照，對照管只要做一管。
 
蔗糖酶活力計算：
 
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 0.1296x -0.12；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。2、按照蛋白濃度計算單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
 
蔗糖酶活力(μg/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。3、按樣本鮮重計算單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
 
蔗糖酶活力(μg/g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，
1mL；T：反應(yīng)時間，10min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

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