過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒
貨號: H0090
規(guī)格: 50T/48S
過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒方法：紫外分光光度法
注意：正式測定之前選擇2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體100μL×3瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出CAT 活性。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒操作步驟：
一、粗酶液提�。�
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500-1000:1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20%或 200w，超聲3秒，間隔10秒。重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（ml）為 1：5-10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、CAT 測定操作
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm處，蒸餾水調(diào)零。
2、 CAT檢測工作液的配置：用時在每瓶試劑二（100μL）中加入20ml試劑一，充分混勻，作為工作液；用不完的試劑4℃保存一周。
3、 測定前將CAT檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴10min。
4、 取 1mL CAT 檢測工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL樣本，混勻 5s；室溫下立即測定 240nm
下的初始吸光值 A1和1min后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2
三、過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒活性計算：
1、 血清（漿）CAT活力的計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷V 樣÷T=678×ΔA
2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算：
a. 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/mg prot）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（V樣×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr
b. 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/g鮮重）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=678×ΔA÷W
3、 按細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算：
單位的定義：每 1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每分鐘反應(yīng)體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/104cell）＝﹝ΔA×V反總÷（ε×d）×109﹞÷（500×V 樣÷V樣總）÷T=1.356×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3L；ε: H2O2 摩爾吸光系數(shù)，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.035ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，1min。W，樣本質(zhì)量，g；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬
原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司
標(biāo)簽：過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒 過氧化氫酶檢測試劑盒 CAT活性檢測試劑盒 CAT檢測試劑盒
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